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Matrigel 使用指南及常见疑问
Matrigel 收货注意事项，请检查：
- 盒子内是否有干冰
- 基质胶是否呈固态，胶面是否水平
- 基质胶颜色是否在正常范围（黄色 – 粉红 – 深红）
产品特性：
Martrigel基质会有色差变化（淡黄色到深红色），是由于酚红和碳酸氢盐与 CO2 的作用引起的，但是与 5%CO2 平衡后色差即会减少。
基质胶冻融操作 ：
收货后，若不立刻使用基质胶，应马上将仍然是冷冻固态的基质胶放进 -20℃ 冰箱保存。使用前须先将基质胶冻融。
冻融：
将基质胶埋于铺满碎冰的冰盒中，然后将整冰盒放入 4℃ 冰箱 overnight 溶解。（普通浓度的基质胶，溶解时间 1-2 天；高浓度基质胶溶解时间 3-7 天）。
分装：
溶解后的须分装保存，以避免反复冻融。液态基质胶，会在 10℃ 以上快速成胶（特别是高浓度基质胶），因此，分装时，接触到基质胶的耗材必须预冷（如移液管、吸头、EP管等），并且整个实验必须无菌、冰上操作。（高浓度的基质胶比较粘稠，用移液器不好吸取，可以使用去掉针头的预冷注射器吸取。）
保存：
分装后的基质胶在冰上应仍然呈现液态，此时将基质胶放进 -20℃ 保存即可。进行实验时，取出分装好的小管，4℃冻融。若分装好后基质胶已经凝固，说明分装操作不能很好地保持低温，导致基质胶已经成胶，不适宜使用。
普通浓度基质胶操作：
包被与成胶
细胞可在 0.5mm 厚度的基质胶表面生长，可以在 1mm 厚度的三维基质内生长。过度稀释的基质胶会形成非胶质的蛋白层，可以用于细胞贴壁，但不能用于细胞的研究分化。为保证基质胶的成胶性能与稳定，稀释浓度不应低于1：3，可用预冷无血清培养基稀释，成胶后立即使用。
薄胶成胶方法：
- 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。
- 将需要使用的培养板置于冰上，加入浓度为 50ul/cm2 生长面积的基质胶。
- 在 37℃ 放置30min，即可使用。
厚胶成胶方法
- 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。
- 将需要使用的培养板置于冰上，将培养的细胞与基质胶混合，用移液枪头使其悬浮于基质中。加入浓度为 150-200 ul/cm2 生长面积的基质胶。
在 37℃ 放置30min，可成胶。也可以加入细胞培养的基质，也可使细胞直接生长在胶表面。
薄层包被方法：
- 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。
- 根据需要，采用无血清培养基稀释基质胶，根据实验需要确定最佳包被浓度。
- 将稀释的基质胶包被与所需的培养器皿中，包被量至少覆盖整个器皿的生长表面，室温下孵育 1 小时。
去除未结合的基质胶，用无血清培养基轻轻地冲洗。备注：普通浓度的基质胶，建议稀释浓度不低于 3mg/ml；我们不能保证稀释浓度低于3mg/ml 能够成胶。
普通浓度的基质胶，不建议用于成瘤实验。
BD细胞回收剂 354253，离散酶354235，冰浴7 小时后回收得到细胞。
肿瘤侵袭实验：
操作过程
- 冻融（对于预包被的 24 孔培养小室请参考 1.1-1.3 操作，对于自己包被好待用的 24 孔小室，请直接从步骤 2 开始）
- 从 -20℃ 冰箱中取出产品，使其自然升温到室温。
- 取出培养板在细胞小室内加入 500μL 37℃ 预热的 PBS，37℃ 无CO2环境下孵育 2 小时。
- 解冻后，小心去除小室内的培养基，避免破坏 Matrigel 基质膜。
- 染色剂后标记法
细胞通过侵袭消化基质膜后迁移到下小室，采用荧光标记定量细胞。细胞的侵袭能力用终点计算法计算得到。对于采用实时动力曲线的计算，推荐使用前标记法。
2.1 如步骤 1 准备培养板。
2.2 胰酶消化细胞单层后制得细胞悬液，溶于无血清 DMEM 培养基，推荐浓度为5×104cells/mL。
2.3 上小室中加入 500μL 细胞悬液（2×104 cells）。
2.4 通过进样口在下小室中加入 750μL 诱导剂。
2.5 在 37℃，5% CO2 条件下孵育培养板和对照板 20-22 小时（由细胞类型决定）。
2.6 孵育后，小心去除上小室中的培养基及基质胶，避免破坏小室的膜及膜底侵袭转移的细胞。
2.7 将培养小室转移到另一块 24 孔板中，结晶紫或钙黄绿素染色。计算。
